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原位微量PicoGreen法定量DNA浓度

[导读]:

分类:酸碱浓度计使用方法说明 发布时间:2018-4-14 更新时间:2019-4-23 作者:丁当科技
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材料
quant-itpicogreendsdna定量试剂盒购于lifetechnologies,molecularprobesdivision(eugene,or,pn-p7589)。picogreen试剂新鲜配制,使用15ulte缓冲液稀释,避光保存,并于2小时内使用。dna标准,来源于青鱼卵dsdna(sigma,pn-a3294)。储存于te缓冲液中(tris-edta,ph7.0)。

方法
所有picogreen反应和检测均在take3板上完成。操作方法与之前介绍的原位法bca蛋白定量相似。图1显示了操作流程和take3板上的排布方法。简而言之,将2ul的标准品和未知样品分别加到take3板的相应检测点位上。然后在相同位置上分别加入2ul的picogreen试剂,使两者比例为1:1,然后用枪头轻轻吹打混匀(注意不要产生气泡)。空白样品为2ul的te和2ul的picogreen试剂加在take3板上的相应检测点位上,同样方式混匀。然后将take3板盖合拢,室温下避光孵育5分钟。在synergyh4的光栅光路和滤光片光路上进行检测或者在synergyht进行检测。所有检测均使用gen5tm软件进行操作和数据分析。所有样品均逐孔进行顶部底部检测,重复2-3次,甲醇拭去样品及残留试剂。

结果讨论
6个标准品浓度测定的标准曲线确定了picogreen分析的dna定量范围是10-1000ng/ml。图2显示了每种检测光路所得到的标准曲线。除光路不同以外,所有检测均采用方差线性回归分析,r2值均>0.999,n=3.很明显,从标准曲线的斜率上看,滤光片系统提供了良好的检测灵敏度。


图2:synergyh4、synergyht的光栅和滤光片光路的最小方差线性回归分析。误差线代表sem(n=3)


参考文献
1.brescia,p.andbanks,p.multi-volumeanalysisofnucleicacidsusingtheepoch™spectrophotometersystem,winooski,(vt),biotekinstruments,inc.,nov,2009.

4.brescia,p.andbanks,p.in-situmicro-volumebicinchoninicacidproteinassay,winooski,(vt),biotekinstruments,inc.,feb,2010.


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探头有专用的探头,根据温度、使用场景不同要选择合适电极探头!

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